Mnoho biomolekul, jako jsou monoklonální protilátky, se skladuje v pufru obsahujícím pomocné látky, konzervační látky
a detergenty, které udržuji stabilitu vzorku. Tyto dodatečné složky mohou často narušovat následnou analýzu a také kontaminovat LC kolonu nebo samotný detektor.
Existuje řada postupů, jak některé z těchto nežádoucích látek odstranit. Centrifugace s použitím gelových filtračních kolonek je jedním z nejrychlejších a nejjednodušších způsobů, jak tyto složky odstranit. Tuto techniku lze také použít
k jednoduchému přenosu analytů z jednoho pufrovacího roztoku do jiného, a to s minimální ztrátou vzorku nebo změnou jeho složení a koncentrace. Tento přístup je rychlý, pohodlný a velice snadný.
Kolonky AdvanceBio jsou určené pro účinnou úpravu vzorku před analýzou proteinů a oligonukleotidů ve vodném prostředí se zachováním jejich přirozené struktury a s vhodnou iontovou sílou a pH, které slouží převážné k odstranění solí a jiných nežádoucích malých molekul. Tyto centrifugační kolonky jsou založeny na principu gelové filtrace a jsou dostupné ve formátu jednotlivých kolonek a 96-jamkových mikrotitračních destiček, které slouží, jak pro analytické, tak pro semipreparativním účely.
| Kat.č. | Popis produktu | počet ks v balení |
| 1980-1103 | AdvanceBio spin columns, < 100 ul | 25 ks |
| 1980-1105 | AdvanceBio spin columns for desalting or buffer exchange, <1000 ul samples, + 4 re-usable adapters | 50 ks |
| 1980-1104 | AdvanceBio spin columns for desalting or buffer exchange, 10-50 ul sample | 1 ks |
| 1980-1106 | AdvanceBio spin column re-usable adapters, for optional use with kat.č.1980-1105 | 8 ks |
| 5043-9312 | Agilent 96-well plate, 0,33 mL, round wells, V shape, polypropylene, 14 mm | 25 ks |
| 5043-9308 | Agilent 96-well plate, 1,2 mL, round wells, U shape, polypropylene, 27 mm | 25 ks |
| 5610-2049 | Centrifuge tube and cap, polypropylene, 50 mL | 25 ks |
| 190065200 | Centrifuge tube PP, graduated, 29 mm o.d., 115 mm, conical base, wide neck, threaded top | 500 ks |
| 5043-9317 | Sealing mat, 96 wells, round, preslitted, silicone | 1 ks |
Princip gelové filtrace
Gelová filtrace neboli vylučovací chromatografie (SEC) je separace založená na různé velikosti částic. V tomto případě se gelová filtrace používá jako skupinová separace, při níž se oddělují složky vzorku nad hranicí molekulové hmotnosti od všech složek pod ní. Proteiny větší než 5 kDa nebo oligonukleotidy delší než 10 nt nebo bp jsou příliš velké na to, aby účinně pronikly pórovou strukturou částic, a eluují se jako první. Menší složky matrice a soli pufru mohou účinněji pronikat do malých pórů v částicích, a tak zůstat na koloně.
Použítí AdvanceBio Spin kolon < 1000 µl
Centrifugační kolonky se semipreparativní stupnicí, které jsou součástí setu kat.č. 1980-1105, jsou určeny pro použití s 50 ml centrifugáčnimí zkumavkami: jedna slouží pro promývací kroky a druhá čistápro samotný odběr vzorků. Centrifugační kolonka je držena v horní části zkumavky pomocí malého bílého plastového adaptéru, jak je znázorněno na obrázku. Každé balení (kat.č. 1980-1105) obsahuje čtyři opakovaně použitelné adaptéry. Dalších osm je k dispozici jako kat.č. 1980-1106. Agilent nabízí dvě různé velikosti balení centrifugačních zkumavek: kat.č. 5610-2049, 25 ks,
a kat.č.190065200, 500 ks.
Použití AdvanceBio Spin 96-jamkových mikrotitračních destiček
Pro vysokou propustnost vzorků v laboratoři slouží 96-jamkové mikrotitrační destičky, které umožňují provádět, jak promývání vorků, tak konečný sběr vzorků. Pro promývací kroky doporučujeme produkt kat.č. 5043-9308 a pro samotný odběr vzorků 96-jamkovou mikrotitrační destičku ve tvaru V, například kat.č. 5043-9312. Během centrifugace jsou mikrotitační destičky pro přečistění a sběr vzorků naskládány na sobě (výška 5,1 cm), je tedy nutné se ujistit, zda Vaše centrifuga je kompatibilní i pro tento formát.
